فلورسنس گونج توانائي جي منتقلي (FRET)
فلورسنس گونج توانائي جي منتقلي (FRET) هڪ غير تابڪاري توانائي جي منتقلي وارو عمل آهي جنهن ۾ ڊونر جوش ٿيل رياست توانائي کي قبول ڪندڙ پرجوش رياست ڏانهن منتقل ڪيو ويندو آهي بين الاقوامي برقي جوڑوں جي رابطي جي ذريعي.هن عمل ۾ فوٽوون شامل نه آهن ۽ ان ڪري غير تابڪاري آهي.هن جائزي ۾ تيز، حساس ۽ سادو هجڻ جا فائدا آهن.
FRET assay ۾ استعمال ٿيل رنگ هڪجهڙائي ٿي سگهي ٿو.پر اڪثر ايپليڪيشنن ۾، مختلف رنگ اصل ۾ استعمال ٿيندا آهن.مختصر ۾، چمڪندڙ گونج توانائي جي منتقلي ڊونر (ڊائي 1) کان قبول ڪندڙ (ڊائي 2) کي ڊونر جي هڪ جوڙي جي منتقلي آهي جڏهن ڊونر گروپ پرجوش آهي.عام طور تي، ڊونر فلوروفور گروپ جو اخراج اسپيڪٽرم قبول ڪندڙ گروپ جي جذب اسپيڪٽرم سان اوورلوپ ڪري ٿو."جڏهن ٻن فلوروفورس جي وچ ۾ فاصلو مناسب آهي (10 - 100 A)، ڊونر کان قبول ڪندڙ ڏانهن فلوروفور توانائي جي منتقلي کي ڏسي سگهجي ٿو."توانائي جي منتقلي جو طريقو ريڪٽر جي ڪيميائي ساخت تي منحصر آهي:
1. ماليڪيولر وائبريشن ۾ تبديل ٿي وڃي ٿي، يعني توانائيءَ جي منتقلي جي چمڪندڙ روشني غائب ٿي وڃي ٿي.(رسيپٽر هڪ روشني quencher آهي)
2. اخراج خود ريڪٽر کان وڌيڪ شديد هوندو آهي، جنهن جي نتيجي ۾ ثانوي فلوروسينس اسپيڪٽرم ۾ ريڊ شفٽ ٿيندي آهي.(Receptors چمڪندڙ emitters آهن).
ڊونر گروپ (EDANS) ۽ قبول ڪندڙ جين (DABCYL) هڪجهڙائي سان HIV پروٽيز جي قدرتي ذيلي ذيلي ذخيري سان ڳنڍيل آهن، ۽ جڏهن ذيلي ذيلي ذيلي ذيلي ذيلي ذيلي ذيلي ذخيرو ختم نه ڪئي وئي آهي، DABCYL EDANS کي ختم ڪري سگهي ٿو ۽ پوء فلورائن کي اڻڄاتل ٿي سگهي ٿو.ايڇ آءِ وي-1 پروٽيز ختم ٿيڻ کان پوءِ، EDANS هاڻي DABCYL جي ذريعي نه ٻرندي آهي، ۽ EDANS لوسيفراسيس بعد ۾ ڳولي سگھجن ٿيون.EDANS جي fluorescence شدت ۾ تبديلين جي ذريعي protease inhibitors جي دستيابي مانيٽر ڪري سگهجي ٿو.
FRET peptides آهن آسان اوزار peptidase nonspecificity جي مطالعي لاءِ.جيئن ته ان جي رد عمل جي عمل کي مسلسل مانيٽر ڪري سگهجي ٿو، اهو اينزيم جي سرگرمي کي ڳولڻ لاء هڪ آسان طريقو مهيا ڪري ٿو.ڊونر / قبول ڪندڙ طرفان پيپٽائڊ بانڊز جي هائيڊولائيزيشن کان پوءِ پيدا ٿيندڙ شين نانومولر ڪنسنٽريشن تي اينزيم جي سرگرمي جو اندازو مهيا ڪري ٿي.جڏهن FRET پيپٽائيڊ برقرار آهي، اهو اندروني چمڪ جي اوچتو غائب ٿيڻ کي ڏيکاري ٿو، پر جڏهن ڊونر / قبول ڪندڙ جي سامهون ڪو به پيپٽائيڊ بانڊ ڀڃي ٿو، اهو هڪ فليش جاري ڪري ٿو، جنهن کي مسلسل ڳولي سگهجي ٿو ۽ اينزيم جي سرگرمي کي پوء مقدار ۾ ڪري سگهجي ٿو.
پوسٽ جو وقت: آگسٽ-14-2023